超声波萃取—压液和谱法的提取、验证方法
提取方法
将堆肥样品(0.5g)放入离心管中，加入已知浓度的标准雌激素混合物;然后用高速涡旋匀浆(1min)，在4℃下保持12 h，以保证药物的吸附。同时制备了非加标堆肥的对照样品。
将体积为5ml的甲醇加入到加标的堆肥样品中;然后，涡旋1分钟，超声15分钟，在4000转/分、4℃下离心5分钟。然后倒出上料，用温和的氮气流蒸发至40C干燥，用1ml甲醇(10%)重组。接下来，固相萃取(SPE)，用 HLB 60 mg-6 ml Supelco进行净化。首先，用3ml甲醇和5ml超纯水对墨盒进行调节，然后，对提取液(1ml)进行过滤，丢弃滤液。墨盒在真空条件下(<2 kPa)干燥1分钟，然后用6mL甲醇(10%)洗涤。在真空条件下(>2 kPa)再次干燥1分钟，用6ml甲醇(10%)洗脱。接下来，用温和的氮气流浓缩洗液，直到在40℃下干燥，用500uL乙腈(ACN)重组。然后用0.2 um PTFE Whatman过滤器过滤，将提取液转移到1mL小瓶中进行 UHPLC-MS/MS分析。
提取效率，即平均回收率，是通过对10个堆肥样品的萃取物进行分析确定的，这些堆肥样品加入了已知雌激素浓度的标准混合物，低(6.0ng-g)、中(60.0 ng-g)和高(堆肥:180ng-g)。平均回收率的变异系数必须小于15%。
超高压液相色谱和质谱法
用UHPLC-MS/MS对重组提取物中的雌激素进行分离和分析。Acquity超高压液相色谱系统(Waters)由脱气器、二元梯度泵、自动进样器(5℃)和柱式烘箱(40℃)组成。所有化合物均使用UHPLC KinetexTM2.6 um XB-C18100 a LC (50 x4.6 mm)柱在单一梯度运行中分离。色谱条件为流速1mL-min，进样量10μL。采用 AB SCIEX API-5000TM三重四极杆(Applied Biosystems/MDS SCIEX)，在负模式下电喷雾电离(ESI)，通过多重反应监测(MRM)检测分析物。流动相为水:ACN(50:50)等压相。MS参数分别为cad气体和幕压8 psig和10 psig,GS1/雾化器和GS2/涡轮气体流速分别设置为20L-min。离子喷雾电压(IS)固定构-4500V，源温度固定为400℃。
方法验证
验证是根据国际分析方法验证统一会议的指导方针进行的。这些准则通常用于制药业的产品纯度测试，而不是用于环境监测;然而，一些测试在验证上是相似的。本研究按照以下标准对方法进行验证:线性度、检出限(LOD)和定量限(LOQ)、日内精密度(重复性)和日内精密度(再现性)。线性通过决定系数(R2>0.98)和响应因子间变异系数(CV<15%)验证各分析物的校准曲线线性。为了生成校准曲线，制备了标准的雌激素混合物，得到五种不同浓度的溶液(10 ng-mL-'，50 ng-mL,100 ngmL-，500 ngmL和1000 ngmL)。加入0.5g(干基)堆肥样品。
结论
建立了超声溶剂萃取-固相萃取-超高效液相色谱-质谱联用分析的同时提取、检测和定量生物感染性危险废弃物堆肥中4种雌激素的方法。该方法符合国际分析验证统一会议的的验证标准。获得了适宜的线性水平。适当的样品制备、以甲醇为提取溶剂的超声波提取、用HLB 60mg-6ml Supelco和乙腈重构洗脱液进行充分的清理是保证四种雌激素高回收率的必要条件。使用水和ACN(50:50)的等温流动相，在负模式下电喷雾电离，仅在1.5分钟内实现了适当的化七合物分离。LC0Q在文献中报道的类似基质(如土壤、改良土壤、污泥、消化污泥、沉积物和堆肥生物固体)的值范围内。因此，该亥分析方法被推荐用于测定与使用的具有负电离和类似结构的雌激素。它的应用将有助于有合适的化合物回收率，可接受的检测和定量水平。#超声波 # 超声波提取
提取方法
将堆肥样品(0.5g)放入离心管中，加入已知浓度的标准雌激素混合物;然后用高速涡旋匀浆(1min)，在4℃下保持12 h，以保证药物的吸附。同时制备了非加标堆肥的对照样品。
将体积为5ml的甲醇加入到加标的堆肥样品中;然后，涡旋1分钟，超声15分钟，在4000转/分、4℃下离心5分钟。然后倒出上料，用温和的氮气流蒸发至40C干燥，用1ml甲醇(10%)重组。接下来，固相萃取(SPE)，用 HLB 60 mg-6 ml Supelco进行净化。首先，用3ml甲醇和5ml超纯水对墨盒进行调节，然后，对提取液(1ml)进行过滤，丢弃滤液。墨盒在真空条件下(<2 kPa)干燥1分钟，然后用6mL甲醇(10%)洗涤。在真空条件下(>2 kPa)再次干燥1分钟，用6ml甲醇(10%)洗脱。接下来，用温和的氮气流浓缩洗液，直到在40℃下干燥，用500uL乙腈(ACN)重组。然后用0.2 um PTFE Whatman过滤器过滤，将提取液转移到1mL小瓶中进行 UHPLC-MS/MS分析。
提取效率，即平均回收率，是通过对10个堆肥样品的萃取物进行分析确定的，这些堆肥样品加入了已知雌激素浓度的标准混合物，低(6.0ng-g)、中(60.0 ng-g)和高(堆肥:180ng-g)。平均回收率的变异系数必须小于15%。
超高压液相色谱和质谱法
用UHPLC-MS/MS对重组提取物中的雌激素进行分离和分析。Acquity超高压液相色谱系统(Waters)由脱气器、二元梯度泵、自动进样器(5℃)和柱式烘箱(40℃)组成。所有化合物均使用UHPLC KinetexTM2.6 um XB-C18100 a LC (50 x4.6 mm)柱在单一梯度运行中分离。色谱条件为流速1mL-min，进样量10μL。采用 AB SCIEX API-5000TM三重四极杆(Applied Biosystems/MDS SCIEX)，在负模式下电喷雾电离(ESI)，通过多重反应监测(MRM)检测分析物。流动相为水:ACN(50:50)等压相。MS参数分别为cad气体和幕压8 psig和10 psig,GS1/雾化器和GS2/涡轮气体流速分别设置为20L-min。离子喷雾电压(IS)固定构-4500V，源温度固定为400℃。
方法验证
验证是根据国际分析方法验证统一会议的指导方针进行的。这些准则通常用于制药业的产品纯度测试，而不是用于环境监测;然而，一些测试在验证上是相似的。本研究按照以下标准对方法进行验证:线性度、检出限(LOD)和定量限(LOQ)、日内精密度(重复性)和日内精密度(再现性)。线性通过决定系数(R2>0.98)和响应因子间变异系数(CV<15%)验证各分析物的校准曲线线性。为了生成校准曲线，制备了标准的雌激素混合物，得到五种不同浓度的溶液(10 ng-mL-'，50 ng-mL,100 ngmL-，500 ngmL和1000 ngmL)。加入0.5g(干基)堆肥样品。
结论
建立了超声溶剂萃取-固相萃取-超高效液相色谱-质谱联用分析的同时提取、检测和定量生物感染性危险废弃物堆肥中4种雌激素的方法。该方法符合国际分析验证统一会议的的验证标准。获得了适宜的线性水平。适当的样品制备、以甲醇为提取溶剂的超声波提取、用HLB 60mg-6ml Supelco和乙腈重构洗脱液进行充分的清理是保证四种雌激素高回收率的必要条件。使用水和ACN(50:50)的等温流动相，在负模式下电喷雾电离，仅在1.5分钟内实现了适当的化七合物分离。LC0Q在文献中报道的类似基质(如土壤、改良土壤、污泥、消化污泥、沉积物和堆肥生物固体)的值范围内。因此，该亥分析方法被推荐用于测定与使用的具有负电离和类似结构的雌激素。它的应用将有助于有合适的化合物回收率，可接受的检测和定量水平。#超声波 # 超声波提取
1.字母q总是与u在一起，读做/kw/, 此处u不作元音。
2.字母c在字母e, y, i前读做/s/ (cent, city, cycle)， 其他字母前读做/k/(cut, cap, cop)。
3.字母e, i, y之前的字母g可以读做/dʒ/(page, giant, gym)， 其中字母e, i之前的g也可以不读做/dʒ/(get, girl, give)； 其它字母之前的g读做/g/(gate, go, gust)。
4.元音a, e, o, u在音节结尾(开音节)一般读做字母音(长音a, e, o, u)， 有助于学生正确划分并拼读元音字母+辅音字母+元音字母的不熟悉单词(re port…rather than rep ort)。
5.字母i和y经常读做/i/(big, gym)， 但是也可读做I(silent, my, type)。
6.一个英语单词用字母y而不是i的结尾(my, by)。
7.有五种情况末尾的字母e不发音。(如me, she, 和 he的短单词末尾的字母e读做e, 较长的单词末尾的e不发音)
尾字母e不发音应该被认为是”having a job” (承担一项工作)
7.1 bake gene1 time/type code cute 使他前面的元音字母发字母音。.
7.2 love give blue true 使我们不要以一个v和一个u结束一个单词。
7.3 chance bodice charge allege2 使g和c读软音/j/和/s/。
7.4 lit tle cas tle bot tle dab3 ble fid dle 避免一个音节没有一个元音字母。
7.5 are nurse raise bye ewe owe cause 这一条被Spalding女士叫做无工作尾字母e; Sanseri女士叫做老工作尾字母e, 并说前四条之外的不发音尾字母e都叫做老工作尾字母e。
7.5.1 使一个不是复数形式的单词不要以s结尾(dense而不是dens, purse不是purs, false 不是 fals)。
7.5.2 加长短的主意词(main-idea)， 如awe4, ewe, rye
7.5.3 区分同音异形词的含义. 如or/ore for/fore。
7.5.4 中英语和外来语中(那里的尾字母e是要发音的)留下来的， 现在不发音. 如treatise5 giraffe
8.有五种字母组合发/er/的音/, 记住下面的句子。
Her nurse first works early. 这个句子是按英语用法中的降序排列的。
另外，or在w后也可以发/er/的音. 还要记住有些词尾的ar和or也发/er/的音。如dollar, doctor。
9. 1-1-1规则： 单音节单词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化。(如hop---hop ped). 但是词尾是x除外， 因为它由两个音/ks/。
10. 2-1-1规则： 双音节词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化(be gin--- be gin + ning). 第二个音节不重读的不能双写末尾辅音字母(en ter, prof it, bud get)。
11. 去e规则， 以不发音的e结尾的单词在添加以元音开始的词尾变化是需要去掉末尾不发音的e。(come----coming)
12. 是ie还是ei? 一般情况下， 应该是ie, 但是1) c之后用ei; 2)发字母a的音时， 用ei(neighbor, weigh, vein). 还有下面的例外情形Neither foreign sovereign seized counterfeit6 forfeited7 leisure. Plus: either weird8 protein heifer:
13. 音素sh用在一个基本词的开头或是结尾(she, dish)， 还用在一个音节的结尾(fin ish)， 但绝对不会在后一个音节的开头， 除非是以ship结尾(wor ship, friend ship)。
14. 音素si, ti, ci最常用在一个基本词的第二及以后的开头， 发音/sh/. 常常可以通过考察词根和根词来确定发/sh/时用什么样的音素。比如
infect to in fec tious / collect to col lec tion / potent9 to po ten tial
music to mu si cian / space to spa cious / finance to fi nan cial
soci (companion) to so cial / ancien (old) to an cient
cruc (cross) to cru cial / speci (kind) to spe cial
15. 音素si在前一个音节以s结尾时(ses sion)发/sh/, 一个基本词经过词尾变化后只有一个s(tense---tension)， 其中的音素si发/sh/。
discuss to dis cus sion / compress to com pres sion / admis to ad mis sion
16. 音素si可以发/zh/, 如vi sion, di vi sion, oc ca sion, ex plo sion。
17. 只有一个元音的单音节词，常常双写词尾的l, s, f. 比如will, off, miss. 有时双音节词也用到这条规则， 如re cess
18. 词尾为长音a时， 常用ay在词尾而不是a. (bay, day, decay)
19. 元音i和o后面有两个辅音时，常发长音. (find, old)
20. s从不在x后， 音素x包含一个/s/音， /ks/。
21. 去L规则1: all单独出现有两个l, 但在前缀中只有一个l。(al most, al so, al though)。
22. 去L规则2: till和full单独出现有两个l, 作后缀只有一个l. (un til, plen ti ful)。
23. 音素dge只用在单元音后面，而且这个元音发短音(badge, edge, bridge, lodge10, budge)。
2.字母c在字母e, y, i前读做/s/ (cent, city, cycle)， 其他字母前读做/k/(cut, cap, cop)。
3.字母e, i, y之前的字母g可以读做/dʒ/(page, giant, gym)， 其中字母e, i之前的g也可以不读做/dʒ/(get, girl, give)； 其它字母之前的g读做/g/(gate, go, gust)。
4.元音a, e, o, u在音节结尾(开音节)一般读做字母音(长音a, e, o, u)， 有助于学生正确划分并拼读元音字母+辅音字母+元音字母的不熟悉单词(re port…rather than rep ort)。
5.字母i和y经常读做/i/(big, gym)， 但是也可读做I(silent, my, type)。
6.一个英语单词用字母y而不是i的结尾(my, by)。
7.有五种情况末尾的字母e不发音。(如me, she, 和 he的短单词末尾的字母e读做e, 较长的单词末尾的e不发音)
尾字母e不发音应该被认为是”having a job” (承担一项工作)
7.1 bake gene1 time/type code cute 使他前面的元音字母发字母音。.
7.2 love give blue true 使我们不要以一个v和一个u结束一个单词。
7.3 chance bodice charge allege2 使g和c读软音/j/和/s/。
7.4 lit tle cas tle bot tle dab3 ble fid dle 避免一个音节没有一个元音字母。
7.5 are nurse raise bye ewe owe cause 这一条被Spalding女士叫做无工作尾字母e; Sanseri女士叫做老工作尾字母e, 并说前四条之外的不发音尾字母e都叫做老工作尾字母e。
7.5.1 使一个不是复数形式的单词不要以s结尾(dense而不是dens, purse不是purs, false 不是 fals)。
7.5.2 加长短的主意词(main-idea)， 如awe4, ewe, rye
7.5.3 区分同音异形词的含义. 如or/ore for/fore。
7.5.4 中英语和外来语中(那里的尾字母e是要发音的)留下来的， 现在不发音. 如treatise5 giraffe
8.有五种字母组合发/er/的音/, 记住下面的句子。
Her nurse first works early. 这个句子是按英语用法中的降序排列的。
另外，or在w后也可以发/er/的音. 还要记住有些词尾的ar和or也发/er/的音。如dollar, doctor。
9. 1-1-1规则： 单音节单词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化。(如hop---hop ped). 但是词尾是x除外， 因为它由两个音/ks/。
10. 2-1-1规则： 双音节词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化(be gin--- be gin + ning). 第二个音节不重读的不能双写末尾辅音字母(en ter, prof it, bud get)。
11. 去e规则， 以不发音的e结尾的单词在添加以元音开始的词尾变化是需要去掉末尾不发音的e。(come----coming)
12. 是ie还是ei? 一般情况下， 应该是ie, 但是1) c之后用ei; 2)发字母a的音时， 用ei(neighbor, weigh, vein). 还有下面的例外情形Neither foreign sovereign seized counterfeit6 forfeited7 leisure. Plus: either weird8 protein heifer:
13. 音素sh用在一个基本词的开头或是结尾(she, dish)， 还用在一个音节的结尾(fin ish)， 但绝对不会在后一个音节的开头， 除非是以ship结尾(wor ship, friend ship)。
14. 音素si, ti, ci最常用在一个基本词的第二及以后的开头， 发音/sh/. 常常可以通过考察词根和根词来确定发/sh/时用什么样的音素。比如
infect to in fec tious / collect to col lec tion / potent9 to po ten tial
music to mu si cian / space to spa cious / finance to fi nan cial
soci (companion) to so cial / ancien (old) to an cient
cruc (cross) to cru cial / speci (kind) to spe cial
15. 音素si在前一个音节以s结尾时(ses sion)发/sh/, 一个基本词经过词尾变化后只有一个s(tense---tension)， 其中的音素si发/sh/。
discuss to dis cus sion / compress to com pres sion / admis to ad mis sion
16. 音素si可以发/zh/, 如vi sion, di vi sion, oc ca sion, ex plo sion。
17. 只有一个元音的单音节词，常常双写词尾的l, s, f. 比如will, off, miss. 有时双音节词也用到这条规则， 如re cess
18. 词尾为长音a时， 常用ay在词尾而不是a. (bay, day, decay)
19. 元音i和o后面有两个辅音时，常发长音. (find, old)
20. s从不在x后， 音素x包含一个/s/音， /ks/。
21. 去L规则1: all单独出现有两个l, 但在前缀中只有一个l。(al most, al so, al though)。
22. 去L规则2: till和full单独出现有两个l, 作后缀只有一个l. (un til, plen ti ful)。
23. 音素dge只用在单元音后面，而且这个元音发短音(badge, edge, bridge, lodge10, budge)。
你必须要知道的23条英语音标发音技巧：
1.字母q总是与u在一起，读做/kw/, 此处u不作元音。
2.字母c在字母e, y, i前读做/s/ (cent, city, cycle)， 其他字母前读做/k/(cut, cap, cop)。
3.字母e, i, y之前的字母g可以读做/dʒ/(page, giant, gym)， 其中字母e, i之前的g也可以不读做/dʒ/(get, girl, give)； 其它字母之前的g读做/g/(gate, go, gust)。
4.元音a, e, o, u在音节结尾(开音节)一般读做字母音(长音a, e, o, u)， 有助于学生正确划分并拼读元音字母+辅音字母+元音字母的不熟悉单词(re port…rather than rep ort)。
5.字母i和y经常读做/i/(big, gym)， 但是也可读做I(silent, my, type)。
6.一个英语单词用字母y而不是i的结尾(my, by)。
7.有五种情况末尾的字母e不发音。(如me, she, 和 he的短单词末尾的字母e读做e, 较长的单词末尾的e不发音)
尾字母e不发音应该被认为是”having a job” (承担一项工作)
7.1 bake gene1 time/type code cute 使他前面的元音字母发字母音。.
7.2 love give blue true 使我们不要以一个v和一个u结束一个单词。
7.3 chance bodice charge allege2 使g和c读软音/j/和/s/。
7.4 lit tle cas tle bot tle dab3 ble fid dle 避免一个音节没有一个元音字母。
7.5 are nurse raise bye ewe owe cause 这一条被Spalding女士叫做无工作尾字母e; Sanseri女士叫做老工作尾字母e, 并说前四条之外的不发音尾字母e都叫做老工作尾字母e。
7.5.1 使一个不是复数形式的单词不要以s结尾(dense而不是dens, purse不是purs, false 不是 fals)。
7.5.2 加长短的主意词(main-idea)， 如awe4, ewe, rye
7.5.3 区分同音异形词的含义. 如or/ore for/fore。
7.5.4 中英语和外来语中(那里的尾字母e是要发音的)留下来的， 现在不发音. 如treatise5 giraffe
8.有五种字母组合发/er/的音/, 记住下面的句子。
Her nurse first works early. 这个句子是按英语用法中的降序排列的。
另外，or在w后也可以发/er/的音. 还要记住有些词尾的ar和or也发/er/的音。如dollar, doctor。
9. 1-1-1规则： 单音节单词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化。(如hop---hop ped). 但是词尾是x除外， 因为它由两个音/ks/。
10. 2-1-1规则： 双音节词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化(be gin--- be gin + ning). 第二个音节不重读的不能双写末尾辅音字母(en ter, prof it, bud get)。
11. 去e规则， 以不发音的e结尾的单词在添加以元音开始的词尾变化是需要去掉末尾不发音的e。(come----coming)
12. 是ie还是ei? 一般情况下， 应该是ie, 但是1) c之后用ei; 2)发字母a的音时， 用ei(neighbor, weigh, vein). 还有下面的例外情形Neither foreign sovereign seized counterfeit6 forfeited7 leisure. Plus: either weird8 protein heifer:
13. 音素sh用在一个基本词的开头或是结尾(she, dish)， 还用在一个音节的结尾(fin ish)， 但绝对不会在后一个音节的开头， 除非是以ship结尾(wor ship, friend ship)。
14. 音素si, ti, ci最常用在一个基本词的第二及以后的开头， 发音/sh/. 常常可以通过考察词根和根词来确定发/sh/时用什么样的音素。比如
infect to in fec tious / collect to col lec tion / potent9 to po ten tial
music to mu si cian / space to spa cious / finance to fi nan cial
soci (companion) to so cial / ancien (old) to an cient
cruc (cross) to cru cial / speci (kind) to spe cial
15. 音素si在前一个音节以s结尾时(ses sion)发/sh/, 一个基本词经过词尾变化后只有一个s(tense---tension)， 其中的音素si发/sh/。
discuss to dis cus sion / compress to com pres sion / admis to ad mis sion
16. 音素si可以发/zh/, 如vi sion, di vi sion, oc ca sion, ex plo sion。
17. 只有一个元音的单音节词，常常双写词尾的l, s, f. 比如will, off, miss. 有时双音节词也用到这条规则， 如re cess
18. 词尾为长音a时， 常用ay在词尾而不是a. (bay, day, decay)
19. 元音i和o后面有两个辅音时，常发长音. (find, old)
20. s从不在x后， 音素x包含一个/s/音， /ks/。
21. 去L规则1: all单独出现有两个l, 但在前缀中只有一个l。(al most, al so, al though)。
22. 去L规则2: till和full单独出现有两个l, 作后缀只有一个l. (un til, plen ti ful)。
23. 音素dge只用在单元音后面，而且这个元音发短音(badge, edge, bridge, lodge10, budge)。
1.字母q总是与u在一起，读做/kw/, 此处u不作元音。
2.字母c在字母e, y, i前读做/s/ (cent, city, cycle)， 其他字母前读做/k/(cut, cap, cop)。
3.字母e, i, y之前的字母g可以读做/dʒ/(page, giant, gym)， 其中字母e, i之前的g也可以不读做/dʒ/(get, girl, give)； 其它字母之前的g读做/g/(gate, go, gust)。
4.元音a, e, o, u在音节结尾(开音节)一般读做字母音(长音a, e, o, u)， 有助于学生正确划分并拼读元音字母+辅音字母+元音字母的不熟悉单词(re port…rather than rep ort)。
5.字母i和y经常读做/i/(big, gym)， 但是也可读做I(silent, my, type)。
6.一个英语单词用字母y而不是i的结尾(my, by)。
7.有五种情况末尾的字母e不发音。(如me, she, 和 he的短单词末尾的字母e读做e, 较长的单词末尾的e不发音)
尾字母e不发音应该被认为是”having a job” (承担一项工作)
7.1 bake gene1 time/type code cute 使他前面的元音字母发字母音。.
7.2 love give blue true 使我们不要以一个v和一个u结束一个单词。
7.3 chance bodice charge allege2 使g和c读软音/j/和/s/。
7.4 lit tle cas tle bot tle dab3 ble fid dle 避免一个音节没有一个元音字母。
7.5 are nurse raise bye ewe owe cause 这一条被Spalding女士叫做无工作尾字母e; Sanseri女士叫做老工作尾字母e, 并说前四条之外的不发音尾字母e都叫做老工作尾字母e。
7.5.1 使一个不是复数形式的单词不要以s结尾(dense而不是dens, purse不是purs, false 不是 fals)。
7.5.2 加长短的主意词(main-idea)， 如awe4, ewe, rye
7.5.3 区分同音异形词的含义. 如or/ore for/fore。
7.5.4 中英语和外来语中(那里的尾字母e是要发音的)留下来的， 现在不发音. 如treatise5 giraffe
8.有五种字母组合发/er/的音/, 记住下面的句子。
Her nurse first works early. 这个句子是按英语用法中的降序排列的。
另外，or在w后也可以发/er/的音. 还要记住有些词尾的ar和or也发/er/的音。如dollar, doctor。
9. 1-1-1规则： 单音节单词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化。(如hop---hop ped). 但是词尾是x除外， 因为它由两个音/ks/。
10. 2-1-1规则： 双音节词中， 结尾是单元音加单个辅音的， 在添加以元音开始的词尾变化时， 需要将末尾的辅音字母再写一次再加词尾变化(be gin--- be gin + ning). 第二个音节不重读的不能双写末尾辅音字母(en ter, prof it, bud get)。
11. 去e规则， 以不发音的e结尾的单词在添加以元音开始的词尾变化是需要去掉末尾不发音的e。(come----coming)
12. 是ie还是ei? 一般情况下， 应该是ie, 但是1) c之后用ei; 2)发字母a的音时， 用ei(neighbor, weigh, vein). 还有下面的例外情形Neither foreign sovereign seized counterfeit6 forfeited7 leisure. Plus: either weird8 protein heifer:
13. 音素sh用在一个基本词的开头或是结尾(she, dish)， 还用在一个音节的结尾(fin ish)， 但绝对不会在后一个音节的开头， 除非是以ship结尾(wor ship, friend ship)。
14. 音素si, ti, ci最常用在一个基本词的第二及以后的开头， 发音/sh/. 常常可以通过考察词根和根词来确定发/sh/时用什么样的音素。比如
infect to in fec tious / collect to col lec tion / potent9 to po ten tial
music to mu si cian / space to spa cious / finance to fi nan cial
soci (companion) to so cial / ancien (old) to an cient
cruc (cross) to cru cial / speci (kind) to spe cial
15. 音素si在前一个音节以s结尾时(ses sion)发/sh/, 一个基本词经过词尾变化后只有一个s(tense---tension)， 其中的音素si发/sh/。
discuss to dis cus sion / compress to com pres sion / admis to ad mis sion
16. 音素si可以发/zh/, 如vi sion, di vi sion, oc ca sion, ex plo sion。
17. 只有一个元音的单音节词，常常双写词尾的l, s, f. 比如will, off, miss. 有时双音节词也用到这条规则， 如re cess
18. 词尾为长音a时， 常用ay在词尾而不是a. (bay, day, decay)
19. 元音i和o后面有两个辅音时，常发长音. (find, old)
20. s从不在x后， 音素x包含一个/s/音， /ks/。
21. 去L规则1: all单独出现有两个l, 但在前缀中只有一个l。(al most, al so, al though)。
22. 去L规则2: till和full单独出现有两个l, 作后缀只有一个l. (un til, plen ti ful)。
23. 音素dge只用在单元音后面，而且这个元音发短音(badge, edge, bridge, lodge10, budge)。
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