美白功效评价
基于黑色素形成的复杂生物学机制以及美白活性成分可能同时作用多个靶点或者达到多种酶的抑制效果,化妆品美白功效需要在了解配方思路的基础上,多角度多层面进行综合评价。美白功效评价方法大致可分为体外法和在体法。
体外法包括生物化学法、物理化学法、细胞生物学法和三维重组皮肤模型替代法等。在体法可分为动物实验法、主观评价法和客观仪器评价法等方法。
体外法
体外法包括生物化学法、物理化学法、细胞生物学法和三维重组皮肤模型替代法等。
生物化学法主要通过评估美白活性成分对酪氨酸酶的抑制率和对自由基的清除率来表征其美白功效,如体外酪氨酸酶抑制法、抑制L-多巴氧化法和DPPH分析法等方法,此类方法操作简单、结果呈现快速、所需成本低,适用于对美白活性成分的初筛和高通量筛选。
对一些美白机制和量效关系较为明确的美白成分,可通过分析仪器对化妆品中美白成分的种类及含量进行测定,从而间接表征其美白功效。对待测化妆品进行前处理后,采用高效液相色谱(HPLC)、气相谱(GC)等分析检测仪器检测待测物中的特征成分,以此判断其美白效果。物理化学法仅适用于评价有已知美白成分的化妆品,如熊果苷、烟酰胺、抗坏血酸及其衍生物等美白成分,对于结构和成分较复杂的活性物或提取物,不能使用该方法评价其美白效果。
细胞生物学法通过在体外培养特定的细胞模型,并采用分光光度法、图像分析技术等方法在模型中进行细胞毒性测定、细胞内酪氨酸酶活性测定和黑色素含量测定等,对待测物质的美白功效进行评价。细胞生物学法易于观测化妆品中活性物质对细胞生长的抑制程度,便于研究美白活性成分与其他协同因子的联合作用以及进行细胞毒性测试等。
三维重组皮肤模型是体外构建的具有三维结构的人工皮肤组织模型,其方法是利用组织工程技术将人源皮肤细胞培养于特殊的插入式培养皿上。通常使用含黑色素细胞的皮肤模型评价化妆品的美白功效,将待测物涂抹于皮肤模型作用一定时间后,进行酪氨酸酶活性测定、黑色素含量测定、检测相关酶表达等,还可借助像素分析软件定量检测角质细胞摄取黑色素的量,以及检测培养基中角质细胞释放的炎症因子的含量变化等。
在体法
在体法可分为动物实验法、主观评价法和客观仪器评价法等方法。
由于豚鼠皮肤黑素细胞和黑素小体的分布近似于人体,可选用动物实验法进行美白功效评价,一般采用的是黑色或棕色成年豚鼠,在其背部两侧剃毛形成若干无毛区,将待测样品均匀涂布于该区域,一段时间后对该区域的皮肤进行组织学观察;也可以采用花色豚鼠建立美白功效评价动物模型,如利用紫外线连续照射豚鼠皮肤7d形成皮肤黑化模型,在受试部位涂抹待测样品,利用皮肤生物物理检测技术,同时结合组织化学染色及图像分析技术对皮肤黑素颗粒进行定量分析,评价产品的美白效果。
主观评价法包括视觉评估和受试者自我评估,自我评估多采用调查问卷形式进行,视觉评估包括对受试者的肤色和色斑等皮肤情况进行评估。其中,肤色评估通过将人的肤色与标准色卡相比较进行评价,肤色卡基于大量的样本采集并结合计算机软件制作而成,能够反映一定范围内的肤色情况。对于评价色斑的改善情况,可由专业的评测人员对色斑面积大小、严重程度等进行评估。主观评价法因其存在主观因素,需与客观仪器评价等其他方法结合,从而全面地表征化妆品的美白功效。
客观仪器评估是通过仪器对受试者使用化妆品前后的皮肤状态参数进行采集、样本分析或统计分析,进而对化妆品进行功效评价的一种方法。在评价化妆品的美白功效时,一般遴选一定数量的志愿者,将美白剂涂于人体皮肤上,借助客观仪器,观察涂敷美白剂前后肤色特征指标的变化,以评价美白效果;也可选用紫外线诱导的人工黑化模型作为受试部位进行实验,实验中需要选择一种已知有效的脱色物质作为阳性对照进行比较,来判断待测物质的脱色效果。在采用客观仪器法进行美白功效评价时,常见选择国际照明委员会(CIE)规定的Lab色度系统测量受试部位的皮肤颜色变化;也可使用类似MexameterMX18皮肤黑色素测试仪进行评价,其结果输出以黑素指数(MI)和红斑指数(EI)表示,它是基于光谱吸收的原理(RGB),通过特定波长的光照在人体皮肤上的反射量来确定皮肤中黑色素含量,如果测量所得MI越高,说明皮肤中所含的黑色素就越高。另外,应用VISIA皮肤检测仪进行图像分析也可以评价化妆品的美白功效,VISIA皮肤检测仪主要通过对化妆品使用前和使用后的面部图像进行直观比较,以及对图像软件处理得到的面积值、百分比值、方差值、斑点个数等数据进行统计分析,来表征化妆品的美白功效。
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