【Journal of Hepatology | AFP-L3和DCP能强烈预测肝移植后早期肝细胞癌复发】

肝细胞癌(HCC)是一种高度致命性的肿瘤, 甲胎蛋白(AFP)虽然在预测HCC微血管浸润和更差的肿瘤分化方面具有实用性,但也存在不足。近期研究表明AFP-L3(AFP与晶状体凝集素结合的部分)和DCP(脱γ-羧基凝血酶原,也称为维生素K缺乏或拮抗剂II诱导的蛋白质)可以改善HCC的检测和监测,然而它们在预测HCC肿瘤生物学和肝移植(LT)后HCC复发方面的作用尚未得到很好的证实。

2023年10月,来自美国加州大学旧金山医学院内科系的Norman J 等人以“AFP-L3 and DCP strongly predict early hepatocellular carcinoma recurrence after liver transplantation”为题,旨在前瞻性评估生物标志物AFP、AFP-L3和DCP在预测HCC LT后结果中的效用。

这项前瞻性队列研究纳入了2017年—2022年间连续接受LT的HCC患者。获取移植前AFP、AFP-L3和DCP的测量结果。以生物标志物预测HCC无复发生存率的能力为主要终点和生物标志物预测肝植体病理学特征为次要终点,评估了AFP、AFP-L3和DCP在HCC肝移植后结局的预测作用。该队列包括285名中位年龄为67岁的患者(IQR 63-71)。在LT时,生物标志物中位值为AFP 5.0 ng / ml(IQR 3.0-12.1),AFP-L3 6.7%(0.5-13.2)和DCP 1.0 ng / ml(0.3-2.8)。在预测HCC 复发方面,AFP-L3和DCP的表现优于AFP,C统计量分别为0.81和0.86,而AFP为0.74。AFP-L3 ≥15% 和 DCP ≥7.5ng/ml 的双重阳性强烈预测了 LT 后肝细胞癌的复发。

作者的研究证实AFP-L3和DCP对肝移植后HCC复发有良好的预测作用,AFP-L3≥15%和DCP≥7.5 ng/ml的双生物标志物组合阳性的患者LT后3年的Kaplan-Meier无复发生存率显著低于其他HCC患者(43.7% vs 97.0%)。

摘译自 Norman J, Li P, Kotwani P, Shui A, Yao F, Mehta N.AFP-L3 and DCP strongly predict early hepatocellular carcinoma recurrence after liver transplantation. J Hepatol. 2023 Sep 7:S0168-8278(23)05074-2. doi: 10.1016/j.jhep.2023.08.020.

吉林大学第一医院肝胆胰内科 董美丽 温晓玉 报道

#【热点文章】基于银纳米颗粒免疫比色法检测甲胎蛋白
引用本文:张建花, 章志翔, 李蓄涵, 等. 基于银纳米颗粒免疫比色法检测甲胎蛋白[J]. 化学试剂,2023,45(10):40-45.
DOI:10.13822/j.cnki.hxsj.2023.0391

背景介绍
甲胎蛋白(AFP)是临床诊断肝细胞癌(HCC)最广泛使用的血清标志物,可用于HCC的诊断、治疗评估、预后预测和复发监测。传统的AFP蛋白的检测方法存在分析成本高、操作复杂等问题。因此,迫切需要开发一种简便、高效且成本低的方法用于癌蛋白检测。银纳米粒子具有较好的光学性能,制备成本低,可用于构建比色传感实现蛋白检测。基于银纳米粒子的比色法与传统的蛋白检测方法相比,具有操作简单、快速且具有较低的成本效益。
文章亮点
1.提出了一种银纳米粒子比色传感器可实现甲胎蛋白AFP的灵敏、高效检测;
2.操作简单,只需要将分析样本和免疫试剂相混合,发生免疫识别后即可检测;
3.与传统的ELISA和其他蛋白检测方法相比,本方法具有操作简单、快速且具有较低的成本效益,为癌蛋白的检测提供了一种新方案。
内容介绍
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
1.2.1 AgNPs的制备
种子银纳米颗粒的制备:将20 mL质量浓度 1%柠檬酸三钠溶液和75 mL超纯水加入至250 mL圆底烧瓶中,然后将混合液加热至70 °C,恒温反应15 min。
2 结果与讨论
2.1 AFP检测原理
由于AgNPs具有较大的消光系数,表现出尺寸依赖的光学特性,在生物传感领域展现出优异的性能。
2.2 AgNPs的表征
图2a TEM表征表明制备的银纳米颗粒的形貌为球形,粒径均匀,且具有较好的分散性,平均粒径为20 nm(图2b)。
图片

a. TEM;b. 粒径分布;c. XRD;d. UV-vis

图2 AgNPs的表征

Fig.2 AgNPs characterization

2.3 AgNPs-抗体偶联物表征

为实现AFP特异性检测,需采用AFP特异性抗体对AgNP表面进行修饰。在制备AgNPs-抗体偶联物之前,首先采用SH-PEG-COOH对AgNPs表面进行功能化,以通过碳二亚酰胺法进行抗体与AgNPs的连接,并且修饰的PEG可以保持AgNPs胶体的稳定性,使其自身不发生团聚。图3a展示了AgNPs与抗体探针结合前后的UV-vis表征,可以看到经过层层修饰后,AgNPs的最大紫外吸收峰发生了红移;裸AgNPs的吸收峰为392 nm,经过PEG修饰后,移动至397 nm,继而连接完抗体(包被或标记)后,其紫外吸收峰位置移动至403 nm。
图片

图中I-IV分别表示裸AgNPs,AgNPs-PEG,AgNPs-PEG-anti AFP(包被)偶联物,AgNPs-PEG-anti AFP(标记)偶联物

a. UV-vis;b. DLS

图3 AgNPs经PEG和抗体修饰前后的表征

Fig.3 Characterization of AgNPs before and after modification with PEG and antibody

2.4 免疫反应条件优化

免疫反应时间是影响免疫测定性能的重要参数,因此,我们研究了孵育时间对免疫复合物形成的影响。图4展示了AgNPs免疫复合物的粒径和孵育时间的关系。
图片
a.不同孵育时间下AgNPs免疫复合物的DLS图; b. AgNPs免疫复合物的粒径和孵育时间的关系

图4 AgNPs免疫复合物在不同免疫反应时间下的DLS表征

Fig.4 DLS characterization of AgNPs immune-complexes under different immune reaction time

3 结论

本文采用三明治夹心结构,以AgNPs标记抗体作为检测探针,当体系中存在目标蛋白AFP时,抗原-抗体发生免疫识别,形成纳米颗粒团聚体,可通过银纳米颗粒溶液颜色的变化检测样品中目标蛋白含量。结果表明,随着AFP浓度的增大,AgNPs的颜色逐渐从黄色变为无色,并且其最大紫外吸收峰降低。本方法对AFP的检测限为7.4 ng/mL,并表现出较强的选择性。

#儿童健康守护者计划##儿童常见病必备手册#
各个医院的检验设备,主要为满足成人看病需要而预先设定了各种数值。

例如血常规化验单,有结果、参考区间、单位 3 个纵列(见下图),其中参考区间通常是 18 岁以上成人的正常值参考区间的范围。

而结果中的数值,则是根据成人的正常值参考区间范围而确定升高或降低,从而自动标出向上或向下的箭头。家长们根据这个箭头,认为结果的数值是升高或降低了。

儿童不是缩小版的成人,化验单的解读也需要一定的技巧,下面就常见的注意点,例举如下:

[浪]1血常规

[微风]01白细胞新生儿白细胞正常值(15~20)×109/L,以后逐渐下降,到 6 个月至 2 岁期间,白细胞正常值(11~12)×109/L[1,2],以后再逐渐降至成人白细胞水平,即(3.5~9.5)×109/L。

在此之前,白细胞箭头都是向上的,不能认为是白细胞升高。

中性粒细胞与淋巴细胞第 1 次交叉(生后 4~6 天)后的婴儿期,淋巴细胞在 60% 左右,中性粒细胞在 30% 左右,这时淋巴细胞箭头都是向上的,中性粒细胞箭头都是向下的,并不提示病毒感染。

到 4~6 岁时中性粒细胞与淋巴细胞第 2 次交叉,约各占 50%,6 岁以后中性粒细胞才逐渐升高达到成人水平,约 65% 左右。

[微风]02血小板                    
儿童血小板基本与成人一样(150~350)× 109/L。但是平时我们看化验单时,儿童的血小板常常是升高的,箭头向上,可达 650 × 109/L,运动后、饱餐后、发热感染、急性炎症等,都会使血小板升高,只要少于 1000 × 109/L,一般不必处理。

如果大于 1000 × 109/L,是血小板增多症,需要进一步查原因并做相应处理 。

[浪]2尿常规
[微风]01尿潜血                  
常常见到的是尿潜血(+ -)或尿蛋白(+ -),而尿红细胞或白细胞计数在正常范围。

剧烈运动、久站时,尿中可出现暂时性微量红细胞 [3],尿中某些来自于食物的不耐热酶的过氧化物酶样作用、大量维生素 C、剧烈运动产生肌红蛋白尿等,可出现尿潜血阳性而红细胞正常 [1]。

尿潜血(+ -)可以随访观察,必要时进一步检查。

[微风]02尿蛋白                    
剧烈运动、发热、精神紧张、低温,都可以出现一过性功能性蛋白尿,一般尿蛋白定性不超过 (+),定量不超过 0.5 g /24 小时 。

[微风]03尿酮体                    
另外,常常见到尿糖阴性而尿酮体阳性 (+) 至 (++),在非糖尿病儿童,饥饿、发热消耗、严重腹泻、呕吐、剧烈运动,均可导致脂肪分解增加,发生酮症而出现尿酮体,并非就是酮症酸中毒,可以随访观察。

[浪]3血电解质
新生儿生后 1 周内,血钾、磷、氯偏高,血钠、钙、碳酸氢盐偏低 [1,4],例如,2~3 天血钾可达 7.7~8.9 mmol/L,新生儿期后血磷仍然较高。

成年人血磷 0.97~1.61 mmol/L,儿童 1.29~1.94 mmol/L[2]。

[浪]4血生化
[微风]01转氨酶                    
新生儿转氨酶偏高,生后 10 天内,谷丙转氨酶 < 67 U/L,谷草转氨酶 < 45 U/L 都是正常的。

[微风]02碱性磷酸酶                    
小儿的碱性磷酸酶(ALP)正常值高于成人,成人为 20~90 金氏单位/L,新生儿为 35~100,1 个月至 1 岁为 70~250,1~3 岁为 70~210,3~10 岁为 70~180,10~16 岁为 100~280 金氏单位/L,18 岁后正常值与成人相同。

如果应用磷酸对硝基苯酚法检测,ALP 正常值上限在 1~12 岁 < 500 U/L,12~15 岁 < 750 U/L 是正常的,而成人为 40~150 U/L。

在生长加速、婴幼儿时期高磷血症、急性疾病、应用某些药物等,均可导致 ALP 升高。因此不能单凭血清 ALP 升高就诊断佝偻病。

诊断佝偻病可测定骨碱性磷酸酶(BALP),> 250 U/L 为升高,比 ALP 更有特异性 。

[微风]03蛋白                    
血清总蛋白和白蛋白,在新生儿和婴幼儿期偏低,新生儿期总蛋白为 46~70 g/L,7 个月至 2 岁为 51~75 g/L,3 岁以后 62~76 g/L,成人 60~80 g/L。

血清白蛋白,新生儿期为 28~44 g/L,1~14 岁 38~54 g/L,成人 40~55 g/L,60 岁以后又降低,为 34~48 g/L。

[浪]5甲胎蛋白
成人甲胎蛋白(AFP)正常值 < 20 μg/L(放免法)。

新生儿期 AFP 正常值是 1000~3500 μg/L(放免法),如 > 3500 μg/L 才为异常,常规实验室测定最高限为 1000 μg/L,因此新生儿检查 AFP 并无意义。

小儿 > 3 个月的 AFP 同成人 AFP 正常值。如 2 个月后 AFP 持续升高则有病理意义。

[浪]6白细胞和粒细胞减少
临床上常见的白细胞和粒细胞减少多为暂时性的,常由病毒感染或药物引起。

在上呼吸道等病毒感染引起者,常于起病 24~48 小时内粒细胞减少,持续 3~5 天,多为自限性,一般不服用升白药物也能自行恢复。

由药物引起者,粒细胞减少可持续数天至数周,停药后可完全恢复正常。

如果随访复查,粒细胞持续减少,应寻找原因并且做进一步检查,排除血液系统疾病 。

感染等原因可使粒细胞易于附着在小血管壁上,使边缘池中的粒细胞增多,造成血液循环(循环池)中粒细胞减少,这称为假性粒细胞减少症。相反,运动或使用肾上腺素,也可使粒细胞自边缘池进入循环池,使粒细胞增多。

[浪]7血小板减少
临床上常见的是继发性血小板减少,多为轻度至中度减少,常由病毒感染或细菌感染,如上呼吸道感染、巨细胞病毒感染、水痘、幽门螺杆菌感染等引起;或因接种疫苗,如麻疹-风疹-腮腺炎疫苗等引起;或因药物应用,如解热镇痛药、抗生素等引起。

怀疑感染所致者,原发病治愈后血小板可恢复;怀疑药物所致者,停药后 2 周血小板可恢复正常。

诊断免疫性血小板减少症,应先排除这些继发性血小板减少。另外,有一种假性血小板减少症,也应该引起注意,抽血检测血小板的试管,应用肝素或枸橼酸钠抗凝管,不能用 EDTA 抗凝管。

EDTA 可导致血小板聚集成团,造成血小板计数减少,为 ETDA 依赖性假性血小板减少症。另外,在室内温度较低时,抽血后放置时间长,也可导致血小板聚集成团,造成血小板计数减少 。(来源:丁香园儿科时间)


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