#铁道模型# 21年7月
OJ No.06机关车DD51 货物A更新机
10-354 100系新干线Grand光 6节基本组/增结组(再贩)
3020-1 EF58后期形 蓝色大窗(再贩)
5067 NAHA11(再贩)/5068 NAHAHU11
10-1400 西武铁道40000系 4节基本组(再贩)
10-1432 KOKI106&107 无车厢搭载 10节组(再贩)
10-1433 KIKI107 无车厢搭载 2节组(再贩)
5256 SUHA32/5257SUHAHU32/5258 SUHA33(再贩)

NhaA回路VIII-IX处252位(E252C)处Glu的单Cys置换大大增加了Naha的Na / H反转运蛋白活性的Na Km(50倍),并改变了NhaA活性的pH依赖性 ,以一个pH单位调节至碱性范围。同时,E252C引起类似的碱性pH值变化,与pH诱导的VIII-IX环构象变化有关。
因此,尽管野生型NhaA的Na / H反转运蛋白活性及其在环VIII–IX的Lys249位置对胰蛋白酶的可及性随pH在6.5至7.5之间增加,但E252C的响应在pH高于8时发生。

除了Glu241,回路VIII-IX仅包含其他一个Glu(在位置252)。因此,在本文中,我们替换了Glu252与Cys并探索了E252C的特性膜中以及DM中蛋白质的溶解和纯化后的突变体。我们发现,与E241C和VIII-IX环中的其他两个突变引起NhaA活性的pH值发生酸性变化相反,单个氨基酸变化E252C会导致NhaA的pH依赖性显着的碱性变化。Na / H的N / A反转运蛋白活性大大增加了Na和Li的反转运蛋白的Km。同时,E252C突变在VIII-IX环的构象变化的pH依赖性中引起类似的碱移。值得注意的是,发现在位置E252C的这种构象变化对Naha和Liha(NhaA反转运蛋白的特定配体)都特别敏感。Loop VIII-IX的Cys替代突变体-Cys-lessNhaA(CL-NhaA)的表达与野生型蛋白相似,并且具有活性(图1D和参考


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